Kultur Jaringan: Sterilisasi Tanaman Gaharu

Assalamu’alaikum sahabat,

Kali ini saya akan bercerita mengenai praktikum lanjutan kultur jaringan. Selasa 27 November 2018 kami mahasiswa Agroekoteknologi 2016 melaksanakan praktikum lanjutan kultur jaringan. Kali ini kegiatan praktikumnya sangat seru yaitu tentang “Sterilisasi Tanaman Gaharu”.

Strerilisasi
Pembuatan Kultur Aseptik

1.      Seleksi Sumber Eksplan

Eksplan adalah tanaman yang digunakan sebagai bahan untuk inisiasi suatu kultur. Pemilihan eksplan berdasarkan sifat tanaman induk.  

2.      Permudaan Sumber Eksplan

Bagian tanaman yang digunakan sebagai sumber eksplan adalah akar, tunas, daun, pucuk, buku, embrio, kotiledon dan lain-lain. Semakin besar ukuran eksplan, makan semakin besar eksplan terkontaminasi

3.      Pemeliharaan Sumber Eksplan

4.      Sterilisasi

Adalah proses penghilangan kontaminan dari permukaan eksplan

Bahan sterilisasi dibagi dua:

·         Sterilisasi di luar laminar, bahan yang digunakan adalah bakterisida, fungisida, tween, aquades.

·         Sterilisasi di dalam laminar, bahan yang digunakan adalah aqua steril, NaOCl (bayclin), betadine (bahan desifektan).

Efektitifitas desifektan dipengaruhi oleh:

A.    Lama Perendaman

B.     Konsetrasi Desifektan

Jika konsentrasi desifektan tinggi dan waktu perendaman tinggi , maka efektivitas penghilangan mikroorganisme pada eksplan juga tinggi. Hal itu dapat menyebabkan kerusakan jaringan semakin tinggi dan untuk menguranginya adalah dengan optimasi yaitu strilisasi agar eksplan tumbuh stabil.

Prosedur sterilisasi eksplan dipengaruhi oleh:

1.      Tipe tanaman

2.      Ukuran eksplan

3.      Kondisi eksplam

4.      Kualitas desifektan
#suatu prosedur tidak baku untuk diterapkan pada semua jaringan
Kondisi eksplan harus diperbaiki jika kontaminasi tinggi yaitu dengan cara:

1.      Untuk mengurangi kontaminasi cendawan à meningkatkan konsentrasi desifektan

2.      Jika tingkat kontaminasi bakteri tinggi àmeningkatkan waktu yang digunakan
+ providen iodine (Betadine 10%) kisaran aktu 15-30 menit
Setiap bahan tanaman mempunyai tingkat kontaminan yang berbeda:

1.      Jenis tanaman

2.      Bagian tanaman yang digunakan

3.      Morfologi permukaan -> tanaman berbulu

4.      Lingkungan tumbuh

5.      Musim waktu mengambil sumber eksplan

Musim yang paling bagus dalam pengambilan eksplan adalah musim kemarau

6.      Umur tanaman

7.      Kondisi tanaman

Sterilisasi Gaharu

·         Dilakukan di luar laminar

1.      Tunas (apek dan lateral)

Pisahkan batang dari daunnya

2.      Cuci dengan air steril ditambahkan tween 2-3 tetes dengan waktu 10 menit

#tween berfungsi untuk membersihkan dan memudahkan penyerapan desifektan pada pori-pori

Tween

3.      Eksplan direndam dalam larutan fungisida (2gr/liter) dan bakterisida (3gr/liter)selama 1 jam. Lalu homogenkan.

 Penambahan fungisida dan bakterisida

Eksplan dihomogenkan

·         Dilakukan di dalam laminar

4.      Bilas eksplan dengan air steril ±3 kali

5.      Rendam menggunakan bayclin dengan konsentrasi dan waktu tertentu

Konsentrasi NaOCl yang digunakan adalah 20% ditambah aqua steril sampai 100 ml dengan lama perendaman 15 menit.

6.      Bilas dengan air steril ±3 kali

7.      Rendam eksplan dengan betadine selama 30 menit. Proses perendaman dilakukan di dalam cawan petri steril

8.      Bilas dengan air steril ±3 kali

9.      Tanam eksplan di media prakondisi

10.  Lakukan semua proses dalam keadaan steril, alat-alat yang digunakan sebelum dan sesudah harus dalam keadaan steril saat melakukan penanaman

Perhitungan:

1.      % eksplan kontaminan = ∑ eksplan terkontaminasi × 100% / ∑ eksplan tanam

2.      % eksplan mati = ∑ eksplan mati × 100% / ∑ eksplan tanam

3.      % eksplan steril = 100% - (% kontaminan + % mati)

Dalam melakukan strerilisasi dan penanaman semua harus dalam keadaan steril, sebelum memasuki ruangan harus menggunakan jas lab dan harus dalam keadaan bersih mencengah masuknya kontaminasi. Semua bahan dan alat harus disterilkan terlebih dahulu, bahan yang digunakan tidak boleh dipegang dengan tangan. Sebelum bekerja dalam laminar pastikan tangan kita di semprotkan alkohol untuk menhindari kontaminasi. Praktikum ini sangat menyenangkan namun harus teliti dan hati-hati karena resiko pengerjaan dalam laminar cukup besar jika tidak berhati-hati, jauhkan peletakkan alkohol dan bunsen dalam laminar. Pastikan saat pengerjaan tidak banyak bicara atau bercanda untuk menghindari kecelakaan kerja.

Cukup sekian cerita saya tentang praktikum kuljar part 2 ini, tunggu kelanjutan cerita praktikum berikutnya..

Wassalamu’alaikum